Jy kan ook jou monster ontsout deur ultrafiltrasie tot 1 tiende van vorige volume, wat weer verdun en UF-stap herhaal. Die beste metode vir ontsouting is ontsouting deur gelfiltrering teen 50 mM buffer, as ultrafiltrasie (klassiek, nie sentrifugale nie).
Wat is ontsouting in proteïensuiwering?
Ontsouting word gebruik om soute uit proteïenoplossings, fenol of nie-geïnkorporeerde nukleotiede van nukleïensure of oortollige kruisbinding of etikettering van reagense van gekonjugeerde proteïene te verwyder.
Hoe suiwer jy proteïene?
In grootmaat-proteïensuiwering is 'n algemene eerste stap om proteïene te isoleer presipitasie met ammoniumsulfaat (NH4) 2SO4. Dit word gedoen deur toenemende hoeveelhede ammoniumsulfaat by te voeg en die verskillende fraksies van die gepresipiteerde proteïen te versamel. Vervolgens kan ammoniumsulfaat met dialise verwyder word.
Hoe buffer jy proteïene uit?
Buffer-uitruiling word egter uitgevoer deur eers te equilibreer met die kolomhars met die buffer waarin die monster moet beland. In beide gevalle sal die bufferbestanddele wat die monster dra in die kolom sal vervang word deur die oplossing waarmee die kolom vooraf geëquilibreer is.
Watter van die volgende chromatografietegnieke kan toegepas word vir die ontsouting van proteïene?
Soos hierbo genoem, kan gelfiltrasie effektief vir proteïen gebruik wordontsouting en word bewerkstellig deur eers die jelfiltrasiekolom met water te ewenaar. Bufferuitruiling word egter bewerkstellig deur eers die kolomhars met die teikenbuffer te ewenaar.
