Sodra selle los lyk, voeg 2 volumes voorafverwarmde volledige groeimedium by om tripsien te deaktiveer. Versprei die medium liggies deur 'n paar keer oor die sellaagoppervlak te pyp om herstel van >95% van selle te verseker.
Hoe stop ek tripsienaktiwiteit?
Die tripsienvertering kan gestop word deur vries of deur die pH van die reaksie tot onder pH 4 te verlaag deur miere-, asyn- of trifluorasynsuur by te voeg (tripsien sal aktiwiteit herwin wanneer die pH word bo pH 4 verhoog). Verteerde monsters kan by -20°C gestoor word.
Wat neutraliseer tripsien?
A buffer wat kalsium- en magnesiumione bevat sal ook tripsienaktiwiteit vertraag. FBS is egter die meer effektiewe manier om tripsienaktiwiteit te inhibeer.
Deaktiveer serum tripsien?
Serum inaktiveer die oorblywende tripsien van ensiematiese vertering van die niere en die proteolitiese ensieme wat daarna deur die selle gesintetiseer word. Vars getripsinede selle kon tot monolae gekweek word in die afwesigheid van serum mits hulle herhaaldelik gewas word om oorblywende tripsien te verwyder.
Hoeveel media neem dit om tripsien te deaktiveer?
Solank jy ten minste 1:1-verhouding van 5-10% serum-bevattende medium met jou tripsien gebruik, behoort daar meer as voldoende inhibisie te wees, gevolg deur sentrifugering en medium ruil met vars medium.
