In die eerste plek laat beide EcoR1 en Xba1 5' oorhange wanneer hulle DNA verteer (soos Nde1). In beide gevalle is die 3'-kant ingebou, daarom kan poliermase basisse byvoeg. Tweedens kan alle polimerases net basisse by 'n 3'-kant voeg, so die Klenow sal 4 basisse by die teruggetrekte 3'-kant van beide terreine voeg om stomp punte te genereer.
Laat beperkingsensieme 'n 5-fosfaat agter?
Vektore en insetsels wat deur restriksie-ensieme verteer word, bevat die nodige terminale modifikasies (5'-fosfaat en 3'-hidroksiel), terwyl fragmente wat deur die Polimerase-kettingreaksie (PCR) geskep word nie dalk nie.
Kan stomp punte gebind word?
Stom-end-ligasie
Stom-end-ligasie behels nie basisparing van die uitstaande punte nie, dus enige stomp punt kan aan 'n ander stomp punt gebind word. Stomp punte kan gegenereer word deur beperkingsensieme soos SmaI en EcoRV.
Produseer Taq-polimerase stomp punte?
Yes… Taq Polymerase voeg A-Overhangs by as jy die finale uitbreidingstap by 72 dC op PCR hou. Meestal gebruik vir TA Kloning.
Waarom gebruik Klenow-fragment in DNA-volgordebepaling?
Die Klenow-fragment is uiters nuttig vir navorsingsgebaseerde take soos: Sintese van dubbelstring-DNS vanaf enkelstring-sjablone . Vul teruggetrekte 3'-punte van DNA-fragmente in om 5'-oorhang stomp te maak . Verteer uitstaande 3'-oorhange weg.